中国骨伤 2000年第5期第13卷 实验研究

类风湿关节炎及骨关节炎血清和滑液中一氧化氮的测定

作者：高培国　武永刚　王坤正　李旭东

单位：高培国（西北工业大学，陕西　西安　710064）；武永刚（内蒙古巴盟医院，内蒙古）；王坤正 李旭东（西安医科大学第二附属医院，陕西　西安）

关键词：关节炎；类风湿；骨关节炎；一氧化氮

　　【摘要】　目的　研究一氧化氮（NO）在类风湿性关节炎（RA）及骨关节炎（OA）病变中的作用。方法　采用亚硝酸盐间接法测定了40例RA、20例OA患者血清及滑液NO的含量变化，并与年龄相匹配的健康人相比较。结果　RA患者血清及滑液NO的浓度呈正相关（r＝0.417，P＜0.05）。RA和OA患者血清NO浓度均低于滑液中的，但显著高于正常对照组血清NO浓度；RA患者滑液NO浓度高于血清中，且明显高于OA组滑液NO浓度。结论　NO在RA和OA患者骨关节中可能主要由滑膜产生；NO可能参与了类风湿性关节炎病变过程，且在其中起一定损害作用。

Determination of Nitrogen Mono-oxide in Synovia and Blood Serum of Patients with Rheumatoid Arthritis and Osteoarthritis

GAO Pei-guo　WU Yong-gang　WANG Kun-zheng　et al
（Hospital of Northwest Industrial University　Shanxi Xi′an，710064）

【Abstract】 Objective To evaluate the role of nitrous oxide （NO） in the pathogenesis of rheumatoid arthritis（RA）and osteoarthritis（OA）.Methods The change of NO content in 40 cases of RA and 24 cases of OA of the hip were determined by nitrite indirect method.The results were compared with the data obtained from specimens of healthy persons（blood serum specimens）.Results In patients with RA，NO concentration in blood serum was positively correlated to that in the synovia（r＝0.417，P＜0.05）.In patients with RA and OA，NO concentration in blood serum was lower than that in synovia，but significantly higher than that in control group.NO concentration in synovia in patients with RA was obviously higher than that in patients with OA.Conclusion In patients with RA and OA，intra-articular NO is mainly synthesised by the synovium.The increased NO concentration in blood serum suggested its involvement in the pathogensis of RA.
【Key Words】 Arthritis，rheumatoid Osteoarthritis Nitric oxide

　　自1987年发现血管内皮细胞舒张因子的本质是一氧化氮（NO）以来^［1］，短短数年就发现NO在细胞与细胞间信息传递、血管舒张、免疫及细胞毒性中起重要作用，已知多种细胞，如内皮细胞、巨噬细胞、神经细胞、中性粒细胞、软骨细胞、滑膜细胞等均可以L-精氨酸为底物合成NO。NO对于血供的调节、软骨代谢、破骨、成骨细胞的活性具有较为重要的作用。本文旨在初步研究NO变化与类风湿骨关节炎（RA）病变的关系。

1　材料和方法

1.1　对象　活动性RA患者40例，男14例，女26例，年龄31岁～63岁，平均48.3岁，诊断标准均符合1987年ARA标准。骨关节炎（OA）患者24例，男13例，女11例，年龄43岁～67岁，平均60.4岁。诊断为临床查体，实验室检查，如类风湿因子，C反应蛋白等。术前空腹抽血，术中抽取患髋滑液。对照组各20例，男女各10例，为正常健康人，年龄分别与患病组相匹配。空腹抽血，标本离心后存于－70℃冰箱直至检验。
1.2　方法
1.2.1　血清及滑液NO的测定：NO试剂盒由南京生物医学制剂公司提供。测定原理根据NO半衰期短仅30秒左右，遇氧或水生成硝酸盐，硝酸盐与磺酸及萘乙二胺反应生成粉红色偶氮化合物，通过比色可间接测定NO浓度。据此原理在DU－7型紫外分光光度计上测量NO浓度。
1.2.2　统计学分析：所有数据均以x±s表示，F检验行方差齐性检验后，t检验行组间差异统计分析。

2　结果

　　滑液及血中NO浓度测定结果见表1。

表1　RA与OA患者血清滑液NO含量（±s）

3　讨论

　　本研究显示RA和OA患者滑液中NO浓度明显高于血清中NO浓度，并呈一定正相关，提示NO在骨关节系统中主要是由关节软骨和骨膜产生的。已证明骨关节中NO主要来源于软骨细胞，其次是滑膜组织^［2］。然而，RA与OA患者的软骨多明显变薄并遭到破坏，而滑膜却较正常增生且其内又拥有许多NO产生细胞，如内皮细胞、多核白细胞及淋巴细胞，故可认为NO主要产生于滑膜，而后入滑液，经淋巴系统进入血循环系统。OA患者中高的滑液NO浓度说明OA患者大量滑液渗出是由于滑膜炎性变化而引起的，NO在关节炎性损伤中起了一定作用。
　　本实验发现RA和OA患者血清NO浓度高于相应正常对照组。已有许多研究表明RA和OA患者尤其是RA，血液中可检测出较正常水平高的细胞因子，如TNF-α、IL-1、IL-2等。而这些因子可能增加了NO的产生，但NO在炎性关节中的作用还未被阐明。据本实验结果作者认为NO代谢紊乱可能参与了RA和OA的病变过程。NO在其中有两方面的作用。有研究表明用一氧化氮合成酶抑制剂如N-硝基－L精氨酸甲酯（L-NAME）可阻止或治疗试验性RA和OA大鼠^［3］，提示NO在骨关节病变中有害的一面：①NO通过细胞毒作用，如直接抑制多种线粒体电荷传递系统及柠檬酸循环系统有关的酶，或与超氧化阴离子O^－₂作用形成过氧化亚硝基阴离子（ONOO^－），后者又分解成具有强毒性作用的OH及NO等，从而使骨软骨细胞骨间质细胞受损，并可损伤血管内皮细胞导致骨微循环障碍；②NO抑制软骨蛋白多糖的合成，并促其降解，但机制尚不清楚^［4］；③NO增强淋巴因子活化杀伤细胞的活性。另一方面，NO对关节又有着其保护性的一面，例如NO强有力的扩血管功能和阻止血小板聚集的功能及NO可通过和过氧化物反应去除氧自由基，抑制微血管损伤和滑膜破坏。
　　综上所述，我们发现滑液与血清NO有显著性差异，而且RA和OA患者血清NO较正常显著增高，说明在这类患者中有内源性NO的过量合成，NO参与了RA和OA的发病机制。

参考文献

［1］ Palme RMJ，Ferrige AG，Moneoda S.Nitrite oxide accounts for the biological activity of endothelium driver relaxing factor.Nature，1987，327（4）：524.
［2］ George AC，Martin M，Dawel JB，et al.Nitric oxide：an important articular free radical.J Bone Joint Surg（Am），1996，78（3）：265.
［3］ McCartney FN，Allen JB，Mizel DE，et al.Suppression of arthritis by an inhibitor of NOS.J Exp Med，1993，178（7）：749.
［4］ Hauselmann HJ，Oppliger L，Michel BA，et al.Nitric oxide and proteoglycan biosynthesis by human articular chondrocytes in alginate culture.FEBS Lett，1994，352（4）：361.